Микробиологическая диагностика

Дата добавления: 2014-11-24 | Просмотров: 1648

Бактериологический. Серологический и бактериоскопический методы – ограниченное применение. Для экспресс-диагностики применяется ГЖХ (газожидкостная хроматография).

Бактериологическое исследование: Посев производят на кровяные среды, обогащенные факторами роста (гемин, менадион). Посевы инкубируют в анаэробных условиях. Для выявления в исследуемом матери­але темнопигментированных бактероидов, превотелл, порфиромонад пробу исследуют в УФ лучах (микроколонии светятся красным светом).

На первом эта­пе идентификации определяют родовую при­надлежность изолированных культур. На втором этапе проводят окончатель­ную идентификацию до вида по биохими­ческим тестам, антигенным свойствам.

Газовая хроматография.Для экспресс-диа­гностики анаэробной инфекции применяют метод ГЖХ, основанный на хроматографическом определении в материале от больных специфических продуктов метаболизма об­лигатных анаэробных бактерий — летучих жирных кислот. Наличие жирных кислот - анаэробная этиология вос­палительного процесса. Маркеры: изомасляная и масляная, изовалериановая и валериановая, изокапроновая и капроновая. Аэробные бактерии летучие жирные кислоты не продуцируют.

№ 136 Классификация грибов. Характеристика. Роль в патологии. Лабораторная диагностика. Лечение.

Царство Fungi. Многоклеточные/однокле­точные нефотосинтезирующие микроорганизмы с клеточной стен­кой. Являются эукариотами.

Грибы имеют ядро с ядерной оболочкой, ци­топлазму с органеллами, цитоплазматическую мембрану и многослойную, ригидную клеточ­ную стенку, состоящую из нескольких типов по­лисахаридов, а также белка, липидов. Цитоплазматическая мембрана содержит гликопротеины, фосфолипиды и эргостеролы. Грибы являются грамположительными микро­бами, вегетативные клетки — некислотоустой­чивые. Тело гриба называется талломом.

Различают два основных типа грибов: гифальный и дрожжевой.

Гифальные(плесневые) грибы образуют ветвящиеся тонкие нити (гифы), сплетающиеся в или мицелий. Гифы низших грибов не имеют перегородок. Они представле­ны многоядерными клетками. Гифы высших грибовразделены пе­регородками с отверстиями.

Дрожжевые грибыимеют вид отдельных овальных клеток. Одноклеточные грибы, которые по типу полового размножения распреде­лены среди высших грибов — аскомицет и базидиомицет. При бесполом размножении дрожжи образуют почки или делятся, что приводит к одноклеточному росту.

Среди грибов, имеющих медицинское зна­чение, выделяют 3 типа: зигомицеты (Zygomycota), acкомицеты (Ascomycota) и базидиомицеты (Basidiomycota).

Зигомицеты: низшие грибы, вызывают зигомикоз легких, головного мозга.

Аскомицеты: высшие совершенные грибы, к ним относится возбудитель эрготизма, паразитирующий на злаках. Микозы, дерматомикозы, пневмония, кератоз, аспергиллез.

Базидиомицеты: шляпочные грибы. Болезни: отравление ядовитыми грибами, криптококкоз.

Дейтеромицеты: несовершенные грибы, род Candida, поражающие слизистые оболочки и внутренние органы.

Заболевания:

1. Поверхностные микозы (кератомикозы) — поражения поверхностных слоев кожи и волос:Malassezia furfur, Cladosporium.

2.Эпидермофитии (эпидермомикозы) — поражения эпидермиса, кожи и волос:Epidermophyton floccosum,Microsporum canis.

3.Подкожные, вовлекающие в процесс дерму, подкожные ткани, мышцы: Sportrichum schenckii.

4.Системные, или глубокие, микозы, при которых поражаются внутренние органы и ткани: Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum/

5. Оппортунистические микозы: Candida, Aspergillus, Mucor.

6. Аллергии, вызванные грибами (пневмоаллергии и дермоаллергии).

7. Микотоксикозы— пищевые интоксика­ции, вызванные токсинами грибов.

Лабораторная диагностика: микроскопическое, микологическое, аллергическое, серологическое исследования.

Материал для исследования: гной, мокрота, волосы, кожа, кровь.

Микроскопическое: микроскопия нативных препаратов: изучение строения гриба, расположение спор, культуральная принадлежность.

Для окраски – методы Грамма, Романовского, Циля-Нильсена.

Культуральное (микологическое) исследование: выделение чистой культуры, плотные, жидкие пит. среды.

Серологическое реакции: для диагностики грибковых заболеваний, с грибковыми АГ. (РА, РСК,РНГА,РИФ).

Аллергические пробы – в/к введение аллергенов.

Лечение: поверхностных микозов: удаление пораженных участков с помощью кератолитических средств. Препараты, содержащие дисульфид селена, тиосульфат. Эпидермофитии: противогрибковая терапия, гризеофульвин, антимикотики. Кетоконазол. Амфотерицин В. При кандидозе: нистатин, леворин.

№ 137 Возбудители малярии. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.

Таксономия:тип Apicomplexa, класс Sporozoa, отряд Eucoccidiida, подотряд Haemosporina и виды: Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae, Plasmodium falciparum..

Характеристика возбудителя. Жизненный цикл плазмодиев происходит со сменой хо­зяев: в комаре рода Anopheles (окончательном хозяине) осуществляется половое размноже­ние (образование спорозоидов), а в организме чело­века (промежуточном хозяине) происходит бесполое размножение — шизогония, при которой образуются мелкие клетки — мерозоиты.

После укуса спорозоиты из слюнных желез комара попадают в кровь и далее в гепатоциты, где совершается первый этап размножения — тка­невая шизогония. При этом в гепатоцитах спорозоит переходит в стадию тканевого шизонта (делящаяся клетка). Тканевой шизонт делится с образованием тканевых мерозоитов, поступающих в кровь. Мерозоиты проникают в эритро­циты, в которых совершается несколько цик­лов шизогонии. Из мерозоита в эритроците развиваются трофозоиты — расту­щие формы паразита: кольцевидный трофозоит юный, полувзрослый, взрослый трофозоит. Взрослый трофозоит превращается в много­ядерный шизонт. В эритроцитах мерозоиты дают также начало образованию половых незрелых форм — мужских и женских гамет (гамонтов), которые способны инфицировать ко­маров при кровососании больного малярией.

P. vivax — возбудитель трехдневной маля­рии. В эритроците, при окраске мазка из кро­ви по Романовскому—Гимзе, трофозоит имеет форму кольца — крупная вакуоль в центре с голубой цитоплазмой с рубиново-красным ядром.

P. malariae — возбудитель четырехднев­ной малярии. В эритроците выявляется один трофозоит в ста­дии кольца.

P.falciparum — возбудитель тропической ма­лярии, наличие юных форм па­разита в виде мелких колец в эритроците.

P. ovate — возбудитель трехдневной малярии, паразит в стадии кольца в эритроците имеет более круп­ное ядро, чем P. vivax.

Эпидемиология: источник - человек. Механизм заражения – трансмиссивный, через укус комара.

Патогенез и клиника:Инкубационный пери­од от недели до года. Клинические проявления обусловлены эритроцитарной шизогонией. Малярии свойственно присту­пообразное течение: озноб с сильной голо­вной болью сменяется подъемом температуры до 40С, после чего происходит быстрое снижение температуры с обильным потоотделением и выраженной слабостью. Малярийный приступ вызван выбросом пирогенных веществ из разрушенных эритро­цитов. Приступы приводят к поражению печени, селезенки и почек.

Иммунитет:нестойкий видоспецифический, стадиоспецифический, нестерильный иммунитет.

Микробиологическая диагностика основана на микроскопичес­ком исследовании препаратов крови, окрашенных по Романовскому—Гимзе и обнаруже­нии различных форм возбудителя (красное ядро, голубая цитоплазма). Для обнаружения ДНК паразита в крови ис­пользуют ДНК-гибридизацию и ПЦР В сероло­гическом методе применяют РИФ, РПГА, ИФА.

Лечение: Противомалярийные препараты (хинин, мефлохин, хлорохин). Различают пре­параты шизонтоцидного, гамонтотропного и спорозоитотропного действия.

Профилактика:лечение больных малярией и паразитоносителей, уничтожение переносчиков возбудителя — комаров. Разрабатываются вакцины на основе антигенов, полученных генно-инженерным методом (антиспорозоитная антимерозоитная, антигамонтная).

№ 138 Возбудитель токсоплазмоза. Таксономия. Характеристи­ка. Микробиологическая диагностика. Лечение.

Таксономия:Возбудитель — Toxoplasma gondii, относится к типу Apicomplexa, клас­су Sporozoa, отряду Eucoccidiida.

Характеристика возбудителя.Toxoplasma gon­dii — облигатный внутриклеточный паразит. В жизненном цикле токсоплазм различают несколько морфологических форм: ооцисты, псевдоцисты, цисты, тахизоиты.

Ооцисты формируются в результате по­лового размножения паразита в клетках слизистой оболочки кишечника кошки— окончательных хозяев токсоплазм: разно­полые гаметоциты сливаются с образова­нием ооцисты. Ооцисты выделяются с фекалиями кошки. Попав в кишечник человека, они освобождают спорозоиты, которые рас­пространяются по лимфатическим сосудам, размножаются внутриклеточно бесполым путем. Размножившиеся пара­зиты (тахизоиты) внедряются затем в другие клетки. Они обнаруживаются при острой стадии инфекции.

Тахизоиты имеют характер­ную форму апельсиновой дольк, при окраске по Романовскому—Гимзе цитоплазма голубого цвета, а ядро — рубиново-красного.

Псевдоцисты не имеют оболочки; они об­разуются в пораженных клетках, макрофагах.

Цисты обра­зуются внутри клеток хозяина. Они имеют плотную оболочку.

Культивирование: в куриных эмбрионах и на культурах тка­ней, а также путем заражения мышей и других животных.

Резистентность:Ооцисты могут в течение года сохранять жизнеспособность в окружа­ющей среде. Токсоплазмы быстро погибают при выс. температуре.

Эпидемиология. Источники инвазии виды домашних и диких мле­копитающих, птицы. Заражение че­ловека происходит алиментарным путем в результате употребления в пищу термически слабо обработанных продуктов, содержащих в псевдоцистах и цис­тах трофозоиты паразита.

Патогенез и клиника.Токсоплазмы, проник­шие в организм, достигают с током лимфы регионарных лимфоузлов, размножаются в них (тахизоиты), проникают в кровь, разно­сятся по организму, попадая в клетки ретикулоэндотелиальной системы всех внутренних органов, где образуют псевдоцис­ты и цисты. Токсоплазмы поражают нервные клетки, печень, почки, легкие, сердце, мыш­цы, глаза. Клиническая картина разнообразна: от уме­ренной лимфоаденопатии до лихорадки, сыпи, гепатоспленомегалии, фарингита, менингоэнцефалита, пневмонии и др.

Иммунитет: клеточный и гуморальный иммунитет. Развивается ГЗТ.

Микробиологическая диагностика: Проводится микроскопия мазка (из биоптатов крови, ликвора, пунктатов лимфоузлов), окрашенного по Романовскому—Гимзе. Реже применяется биологический метод: мыши по­гибают через 7—10 дней после парентераль­ного введения им инфицированного матери­ала (крови, ликвора) больных людей. Возможно культивирование токсоплазм на куриных эмбрионах.

Основным в диагностике токсоплазмоза является серологический метод: выявление IgM-антител свидетельствует о ранних сроках заболевания. IgG-антитела достигают макси­мума на 4—8й неделе болезни. Применяются РИФ, РИГА, РСК. Используют также аллергический ме­тод — внутрикожную пробу с токсоплазмином, которая положительна с 4-й недели за­болевания и далее в течение многих лет.

Лечение:комбинация пириметамина с сульфани­ламидами.

Профилактика: неспецифи­ческая - гигиенические требования (мытье рук перед едой; термическая обработка мяса.

№ 139 Возбудители лейшманиозов. Таксономия. Характеристи­ка. Микробиологическая диагностика. Лечение.

Таксономия:тип Sarcomastigophorae, под­тип Mastigophora — жгутиковые, класс Zoomastigophora, отряд Kinetoplastida, род Leishmania.

Характеристика возбудителей: внутриклеточные паразиты, развивающиеся в макрофагах или клетках ретикулоэндотелиальной системы. Размножаются простым делением, проходят два цикла бесполого раз­вития: жгутиковый и безжгутиковый. В жгутиковом цикле паразиты развиваются на питательных средах или в кишечнике мос­кита, зараженного при сосании крови больных людей или животных. Заглоченные москитом амастиготы превращаются в кишечнике в промастиготы, делятся и на 6е-сутки накапли­ваются в глотке москита. Возбудитель имеет удлиненную веретенообразную форму. Протоплазма содержит ядро, цитоплазму, зер­на волютина и кинетопласт. Жгутик, отхо­дящий от заостренного конца, способствует перемещению лейшманий.

Безжгутиковый цикл проходит в ретикулоэндотелиальных клетках печени, се­лезенки, лимфатических узлов, в макро­фагах инфицированного ор­ганизма. Паразиты имеют округлую форму, без жгутиков; при окраске по Романовскому—Гимзе цитоплазма приобре­тает серовато-голубой цвет, а ядро и кине­топласт — красновато-фиолетовый.

Культивирование:питательная среда NNN, содержащую агар с дефибринированной кровью кролика. Лейшмании также растут на хорион-аллантоисной оболочке ку­риного эмбриона и в культурах клеток.

Эпидемиология:в странах теплого климата. Механизм передачи возбудителей — трансмис­сивный, через укус переносчиков — москитов. Основные источники возбудителей: при кожном антропонозном лейшманиозе — лю­ди; при кожном зоонозном лейшманиозе — грызуны; при висцераль­ных лейшманиозах — люди; при кожно-слизистом лейшманиозе — грызуны, дикие и домашние животные.

Патогенез и клиника.Различают два воз­будителя кожного лейшманиоза: L. tropica — возбудитель антропонозного лейшманиоза и L. major — возбудитель зоонозного кожного лейшманиоза.

Антропонозный кожный лейшманиоз характеризуется длительным инку­бационным периодом — несколько месяцев. На месте укуса москитом появляется бугорок, который увеличивается и через 3 месяца изъязвляется. Язвы чаще располагаются на лице и верхних конечностях, рубцуются к концу года. Зоонозный кожный лейшманиоз (рано изъ­язвляющийся лейшманиоз, пендинская яз­ва, сельская форма) протекает более остро. Инкубационный период составляет 2—4 не­дели. Мокнущие язвы чаще локализуются на нижних конечностях. Кожно-слизистый лейшманиоз вызывают лейшмании комплекса L. braziliensis; развивается гранулематозное и язвен­ное поражение кожи носа, слизистых оболо­чек рта и гортани. Антрапонозный висцеральный лейшманиоз вызы­вается лейшманиями комплекса L. donovani; у больных поражаются печень, селе­зенка, лимфоузлы, костный мозг и пищева­рительный тракт.

Иммунитет:стойкий пожизненный

Микробиологическая диагностика.Вмазках (из бугорков, содержимого язв, пунктатов из органов), окрашенных по Романовскому— Гимзе, обнаруживают внутриклеточно распо­ложенные мелкие, овальной формы лейшма­нии (амастиготы). Для выделения чистой куль­туры возбудителя делают посев на среду NNN: инкубация 3 недели. Серологические методы недостаточно специ­фичны. Возможно применение РИФ, ИФА.

Кожно-аллергический тест на ГЗТ к лейшманину применяют при эпидемиологи­ческих исследованиях лейшманиоза.

Лечение:При висцеральном лейшманиозе применяют препараты сурьмы и диамидины (пентамидин). При кож­ном лейшманиозе — акрихин, амфотерицин.

Профилактика:уничтожают больных живот­ных, проводят борьбу с грызунами и моски­тами. Иммунопрофилактику кожного лейшманиоза осуществляют прививкой живой культуры L. major.

№ 140 Возбудитель амебиаза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическое лечение.

Таксономия:тип Sarcomastigophorae, подтип Sarcodina, класс Lobosia, отряд Amoebida.

Морфология:Различают две стадии раз­вития возбудителя: вегетативную и цистную. Вегетативная стадия имеет не­сколько форм: большая вегетативная (ткане­вая), малая вегетативная; предцистная форма, сходная с просветной, образующая цисты.

Циста (покоящаяся стадия) имеет оваль­ную форму. Зрелая циста содержит 4 ядра. Просветная форма малоподвижна, обитает в просвете верхнего отдела толстой кишки как безвредный ком­менсал, питаясь бактериями и детритом.

Большая вегетативная форма образуется, при определенных условиях, из малой вегетативной формы. Она наиболее крупная, образует псевдоподии и обладает движением. Может фаго­цитировать эритроциты. Обнаруживается в све­жих испражнениях при амебиазе.

Культивирование:на питательных средах, бо­гатых питательными веществами.

Резистентность:Вне организма быстро (за 30 мин) погибают вегетативные формы воз­будителя. Цисты устойчивы в окружающей среде, сохраняются в фекалиях и воде. В продуктах питания, на овощах и фруктах цисты сохраняются в течение нескольких дней. При кипячении погибают.

Эпидемиология:Амебиаз — антропо­нозная болезнь; источник инвазии - человек. Механизм передачи — фекально-оральный. Заражение происходит при занесении цист с продуктами питания, водой, через предметы домашнего обихода.

Патогенез и клиника:Цисты, попавшие в кишечник, и образовавшиеся затем из них просветные формы амеб могут обитать в тол­стой кишке, не вызывая заболевания. При снижении резистентности организма амебы внедряются в стенку кишки и размножаются. Развивается кишечный амебиаз.

Трофозоиты тканевой формы подвижны за счет формирования псевдоподий. Они проникают в стенку толстой кишки, вызывая некроз; способны фагоцитировать эритроциты; могут обнаруживаться в фекалиях человека. При некрозе обра­зуются язвы. Клинически кишечный амебиаз проявляется в виде частого жидкого стула с кровью, сопровождающегося лихорадкой и дегидратацией. В испражнениях обнаруживают гной и слизь, иногда с кровью.

Амебы с током крови могут попадать в печень, легкие, головной мозг, в результа­те чего развивается внекишечный амебиаз.

Иммунитет:Нестойкий, активируется пре­имущественно клеточное звено.

Микробиологическая диагностика.Основ­ным методом является микроскопическое ис­следование испражнений больного, а также содержимого абсцессов внутренних органов. Мазки окрашивают раствором Люголя или гематоксилином. Серологические исследова­ния (РНГА, ИФА, РСК): наиболее высо­кий титр антител в сыворотке крови выявля­ют при внекишечном амебиазе.

Лечение:Применяют метронидазол, фурамид.

Профилактика:выявление и ле­чение цистовыделителей и носителей амеб, проведение общесанитарных мероприятий.

№ 141 Значение открытия Д.И. Ивановского. Этапы развития вирусологии. Роль ученых в развитии вирусологии.

Впервые существование вируса доказал в 1892 году Ивановский. В результате наблюдений он высказал предположение, что болезнь табака, под названием мозаичной, представляет собой не одно, а два совершенно различных заболевания одного и того же растения: одно из них - рябуха, возбудителем которого является грибок, а другое неизвестного происхождения. Возбудитель мозаичной болезни табака не мог быть обнаружен в тканях больных растений с помощью микроскопа и не культивировался на искусственных питательных средах. Ивановский открыл вирусы - новую форму существования жизни. Своими исследованиями он заложил основы ряда научных направлений вирусологии: изучение природы вируса, цитопаталогических вирусных инфекций, фильтрующихся форм микроорганизмов, хронического и латентного вирусоносительства.