Тема 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ


Дата добавления: 2014-06-18 | Просмотров: 1753


<== предыдущая страница | Следующая страница ==>

 

Аминокислоты, соединяясь пептидной связью, образуют полипептидные цепи. Линейная последовательность аминокислотных остатков, соединенных между собой пептидными связями, определяет первичную структуру белковой молекулы.

 

ЭТАПЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПЕРВИЧНОЙ СТРУКТУРЫ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ

 

1. Выделение белка из смеси в чистом виде (по одному из признаков: размер молекулы, заряд, специфическое сродство связывания). Определение молекулярной массы белка.

2. Определение N-концевой АК.

3. Определение С-концевой АК.

4. Определение АК-последовательности белковой цепи.

 

Выделение белка из биологического материала основано на его физико-химических свойствах. Чаще всего для этих целей используют кислотно-основные свойства белков (амфотерность, заряд молекулы, изоэлектрическое состояние).

От заряда белковых молекул зависит их:

- растворимость (минимальна в ИЭТ);

- электрофоретическая подвижность;

- структура и биологическая активность.

При растворении в водной среде на поверхности белковой молекулы формируется гидратная оболочка.

Устойчивость белка в растворе зависит:

1) от заряда белковой молекулы;

2) наличия гидратной оболочки;

3) от молекулярной массы белка.

Для выделения нативных белков (без изменения пространственной структуры) используют метод высаливания:

- осаждение солями щелочноземельных металлов: хлорид натрия, сульфат аммония;

- осаждение другими водоотнимающими веществами: спиртом или ацетоном при низких температурах (около –20 °С).

При использовании этих методов белки лишаются гидратной оболочки и выпадают в осадок.

Денатурация — нарушение пространственной структуры белков (первичная структура молекулы сохраняется). Может быть обратимая (структура белка восстанавливается после устранения денатурирующего агента) или необратимая (пространственная структура молекулы не восстанавливается, например, при осаждении белков минеральными концентрированными кислотами, солями тяжелых металлов).

 


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 |

При использовании материала ссылка на сайт Конспекта.Нет обязательна! (0.106 сек.)