Выделение индивидуальных белков

Дата добавления: 2014-06-18 | Просмотров: 1545

Изоэлектрофокусирование

Метод основан на различной величине ИЭТ белков. Белки разделяют методом электрофореза на пластине с амфолином (это вещество, которое формирует градиент pH в диапазоне от 3 до 10). При электрофорезе белки разделяются в соответствии со значением их ИЭТ (в ИЭТ заряд белка будет равен нулю, и он не будет передвигаться в электрическом поле).

Двухмерный электрофорез

Представляет собой сочетание изоэлектрофокусирования и электрофореза с ДДС-Na. Проводят сначала электрофорез в горизонтальном направлении на пластине с амфолином. Белки разделяются в зависимости от заряда. Затем обрабатывают пластину раствором ДДС-Na и проводят электрофорез в вертикальном направлении. Белки разделяются в зависимости от молекулярной массы.

Аффинная хроматография

Метод основан на способности белков связываться со своими лигандами. Используется для выделения и очистки ферментов, иммуноглобулинов, рецепторных белков.

Колонку для аффинной хроматографии заполняют инертным веществом, к которому ковалентно присоединены лиганды (молекулы, с которыми специфически будут связываться определенные белки). При прохождении смеси белков через колонку искомый белок присоединяется к лиганду. Остальные белки свободно выходят из колонки. Белок, который остался в колонке, затем можно выделить с помощью буферного раствора, содержащего лиганд в свободном состоянии. Этот высокочувствительный метод позволяет выделить в чистом виде очень малые количества белка из клеточного экстракта, содержащего сотни других белков.